文末可领取免费科研入门教学资源新冠疫情前，qPCR 在大家的认知里大多仅存在做科研、发论文的实验操作，而如今 qPCR 成为「核酸检测的金标准」，从实验室迈向了大众视野。
其实在被大众知晓之前， qPCR 已经在分子诊断领域，特别是感染性疾病和肿瘤伴随诊断领域的应用广泛。我们为大家准备了一份 Real-time PCR 操作攻略，点击下方查看收藏。👇
而整个 qPCR 实验过程中，获得高质量和完整的 RNA 至关重要，但核糖核酸酶 （RNA 酶）的污染必然导致失败。
由于 RNA 酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而 RNA 制剂中只要存在少量的 RNA 酶就会引起 RNA 在制备与分析过程中的降解，而所制备的 RNA 的纯度和完整性又可直接影响 RNA 分析的结果，所以 RNA 的制备与分析操作难度极大。
那污染都来源于哪里呢？科研人到底可以做什么来规避这种风险呢？
来源主要分为外源性污染和内源性污染。
外源性的 RNA 酶存在于一些客观因素，如实验室中使用的耗材，操作环境的灰尘以及操作人员的皮肤和唾液等。外源性的 RNA 酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而内源性的 RNA 酶大多存在于各种组织和细胞中。
在实验中，一方面要严格控制外源性 RNA 酶的污染，另一方面要最大限度地抑制内源性的 RNA 酶。RNA 酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。RNase 的无处不在，使得实验过程中，难以保存 RNA 样本的完整性，导致实验失败或影响 RNA 分析的结果。
控制外源性 RNase 污染的方法
1. 操作人员全副武装戴手套可很大程度避免源自人手的 RNase 污染
2. 配备专业仪器与试剂RNA操作专用的移液枪；使用 RNase-free 的枪头和离心管；使用 RNase-free 的化合物与试剂；
3. 合适的实验操作环境远离/遮蔽通风孔或开放窗口，走动较少的区域作为 RNase-free 区域；
4. 其他
在 RNA 提取和分析期间，不要进行其他可能引起 RNase 污染的实验。
抑制内源性 RNase 活性的方法
1. 样本保存组织取样后若不直接提取 RNA ，要及时用液氮冷冻存于 -80°C 环境，并尽早进行实验，这样可使 RNA 的降解达到最少。
2. 添加抑制剂在细胞裂解液中加入 RNase 抑制剂（RNase inhibitor），使破碎细胞与灭活 RNase 同步进行，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的 RNase 的活性。
操作方法
👉 RNA 提取
👉 RNA 干扰
👉 RNA 分离与分析实验
实际操作讨论
更多相关的问题请订阅丁香实验的qPCR常见问题👇👇👇
有任何实验问题可以进入丁香实验小程序，搜索相关内容。还能向学长学姐提问，让他们来为你支招～
点击进入丁香实验小程序👇👇👇
实验问题在线问，学长学姐在线答
策划｜蛋黄排版｜77
图片｜丁香实验设计团队