细胞成像分析指的是在活细胞或固定细胞中，使用荧光显微镜检测荧光信号，获得靶点的丰度、定位、相互作用等信息的方法；可用于细胞结构、细胞功能、细胞定位/共定位、分子相互作用、细胞示踪等多个领域的研究，是细胞生物学中应用广泛的方法之一。
细胞成像虽好，实操起来也有不少坑，不仅成像新手搞不清，连经验丰富的师兄师姐也会有失手的时候，今天我们就来挑两个经典的问题来为大家答疑解惑。（文中有惊喜彩蛋
）
情况一：活细胞一染色就死了咋办？
在成像期间或结束后查看细胞的情况时，经常会发现细胞从中途开始状态变差甚至死亡，原因可分为以下几种：
1. 染料浓度太高
解决方法：参考染料说明书中建议的浓度范围，设置多个染料浓度进行预实验，确保染色充分的同时，细胞状态保持良好。
2. 光观察时激发光对细胞造成的损伤
解决方法：尽可能使用灵敏度高的相机；将激发光调弱并且在进行拍摄设定时避免照射激发光；拍摄追求精不要追求张数多；不进行拍摄的时候将激发光切断。
3. 细胞培养及处理时环境不适宜
解决方法：提供合适（温度、二氧化碳浓度、湿度）的培养室及恒温箱；用水分不会蒸发的多孔培养板来培养细胞；处理时避免空调等的风直接吹到样品。
情况二：免疫荧光拍着拍着荧光没了？
当暴露在吸收波的强光下时，所有的荧光染料都会在一定程度上出现褪色或「光漂白」现象。以下为光漂白的可能原因以及解决方案：
1. 强光照射之后产生了自由基和单线态氧
解决方法：使用具有抗氧化剂和自由基清除剂的抗淬灭剂，在不影响细胞的健康的前提下可显著增加试剂和荧光蛋白的稳定性；使用减慢自由基运动的固定剂。
2. 使用的染料不耐光照，容易结构改变发生褪色
解决方法：选择更耐光的染料；使用复染剂来选择和设置像场，再切换到靶点通道进行成像。
3. 过长的强光照射时间
解决方法：缩短曝光时间，例如降低激光功率或使用中性密度滤光片；缩短观察样品的时间，不看时关闭遮板；使用具有较低数值孔径的物镜如低功耗物镜。
（上下滑动查看）
除了细胞成像问题，还有这些麻烦怎么办？
● 荧光蛋白 vs 小分子染料 vs 抗体标记，哪个最适合我的实验？
● 荧光信号总是很弱，要怎么增强？
● 成像时背景高且不均匀，怎么调整？
别担心，《细胞成像分析实验方案》来支援，本手册汇集了成像实验的经典案例和详尽实验方案，不仅有实用的实验技巧，还有试剂耗材清单和图像采集的显微镜类型。现识别下方二维码，马上下载《细胞成像分析实验方案》！参与留言互动，还有丰厚奖品拿。
手册内容抢先看：
细胞增殖分析（基于点击化学）
o 常规荧光法
o 兼容荧光蛋白的荧光法
o 比色 IHC 法
细胞活力分析
o 双色细胞活力/毒性检测
o 双色细胞活力快速检测
细胞定位研究
o 线粒体
o 细胞骨架
o 微管
o 溶酶体
o 内质网
o 细胞核
固定细胞
活细胞
o 荧光蛋白法
活细胞成像
o 线粒体膜电位
o 细胞凋亡
o 氧化应激
o 细胞示踪
免疫标记
o 细胞免疫荧光
o 组织免疫荧光
石蜡切片
冰冻切片
o 免疫荧光信号优化
生物素/链霉亲和素法
酪胺信号放大法
高内涵成像
o 细胞全景绘制
互动有礼
评论区留言，分享你的细胞成像成功小技巧（或失败惨案），截止 2023 年 3 月 3 日 17 点：
✔ 点赞前 10 名即可获得炫彩背包或超实用笔记本 1 个
✔ 点赞前 20 名还有精美纸质版手册送出
内容策划：邹礼平
内容审核：吴军
题图来源：赛默飞
点击「阅读原文」，即可下载电子版《细胞成像分析实验方案》！
↓↓↓