下个月就要硕士论文开题了,小师弟内心阴云密布,关键的免疫沉淀实验数据惨不忍睹,无法顺利完成开题。听说,AI 聊天可以解答各类疑难问题,于是有了以下对话。
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我现在很焦虑,硕士论文就要开题了,研究课题被卡在了免疫沉淀实验里,分离目标蛋白效率低,常出现蛋白非特异性结合的情况,有时候检测出的分子量远低于预期,目前还没找到问题所在,帮我找找原因吧。
好的。结合您提供的信息来看,有可能是抗体的原因。建议您使用品牌知名度高的抗体,或者适当地调整抗体浓度。
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抗体用了很多种,价格还都不便宜,每个实验细节我是十分注意的。样品剩得也不多,这次再做不出来,怕是要被导师批评,不让我硕士论文开题了。我该怎么办?
请不要担心。换个思路和产品或许会让你的实验有所突破。赛默飞公司最近出了一款新的 DynaGreen 磁珠。
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什么是 DynaGreen 磁珠?
由赛默飞世尔科技公司推出的 Invitrogen™ DynaGreen™ 磁珠是一种高磁性的亚微米磁珠,粒径为 250 nm,值得一提的是,DynaGreen™ 磁珠从生产制造到客户端均采用开创性的绿色设计,符合科研人的低碳需求。这些不含塑料微粒的磁珠可高性能地实现蛋白质、蛋白质复合物、蛋白质-核酸复合物和其他抗原(Ag)的直接和间接法免疫沉淀(IP),可以提供具有低非特异性结合的可再现结果,为科研新手开展免疫沉淀实验保驾护航。
福利时间到!快来尝「鲜」吧!
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DynaGreen 磁珠在性能上
有哪些优势?
●无需离心
无需担心因离心而丢失结合材料或破坏温和的抗体-抗原之间的结合,因此可以获得更多目标复合物。
●粒径小
亚微米级粒径改善了磁珠的动力学,有助于将其保持在溶液中,同时增加了捕获目标的表面积,以便能够轻松收集目标蛋白复合物。
●节省抗体
无需大量抗体即可产生准确且可重现的结果。
●无需预清洗步骤
无需预清洗步骤使得非靶标分子所导致的非特异性结合风险降低。
●快速分离目标蛋白
在无需预清洗的免疫沉淀方案中,80 分钟内即可有效完成分离目标蛋白。使用任一款 Thermo Scientific™ KingFisher™ 仪器,可在 40 分钟内实现免疫沉淀自动化,从而大幅减少手动操作时间和手动错误。
DynaGreen 磁珠适合哪些下游应用?
由于 DynaGreen 磁珠所使用的磁性分离技术快速而温和,因此对目标蛋白造成的物理压力非常小。同时还可以提供可重现的样品处理,实现高蛋白产量和低非特异性结合,适合下游质谱分析和蛋白免疫印迹工作流程。
样本制备和蛋白质谱分析工作流程
质谱(MS)是对复杂生物样品中的蛋白质进行鉴定、定量和表征分析的强大工具。样本制备是对蛋白质进行质谱分析时最重要也最耗时的步骤之一,样本提取和制备的质量和可重复性对于分析结果存在显著影响。赛默飞世尔科技提供完整的样本制备和蛋白质谱分析工作流程(图 1)。
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图 1. 质谱分析工作流程
获取高产量、高纯度的蛋白质样品具有一定难度。蛋白质富集是一种用于浓缩样本中目标蛋白的技术,在蛋白质组学分析中是必不可少的步骤,可以用于分离低丰度蛋白或降低样品的复杂性。
使用 DynaGreen 磁珠可以通过直接和间接法免疫沉淀轻松实现蛋白富集。图 2A 和 2B 中显示了使用 DynaGreen 磁珠可以轻松实现高丰度 (CD3) 和低丰度 (CD81) 目标蛋白的高质量 pull-down,与市面上现有产品相比,具有相当或更好的性能。
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图 2A 和 2B. 如图所示,DynaGreen 磁珠具有相当或更好的性能。
所有 IP 实验均按照标准实验方案使用了与抗体和细胞裂解液对应的等量样品材料。我们发现:
与其他常规产品相比较,DynaGreen Protein A 磁珠在直接和间接法免疫沉淀工作流程中表现突出。
DynaGreen Protein A/G 磁珠在间接法免疫沉淀工作流程中具有更好的性能。
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产品亮点
● 依托 Invitrogen™ Dynabeads™ 磁珠绵延三十余年的质量和创新
● 磁珠内核不含微塑料,采用高能效制造及可回收包装,实现可持续的全能产品设计
● 提升直接和间接法免疫沉淀的性能、产量和纯度
● 搭配 KingFisher 纯化系统可实现自动化工作流程
内容策划:潘成
内容审核:吴军
题图来源:赛默飞
图片来源:赛默飞
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