新年伊始，又到了科研人员树立新目标的时候，回想 2022 年，养了 20 余笼小鼠、不下 100 盘细胞、更是做了成百上千次的核酸提取、qPCR、蛋白纯化、测序......
工作做的是不少，拿到的有效数据却少得可怜，其中有三类实验，最常出现问题，那就是：
师妹
师姐，蛋白表达不出来要怎么解决呢？
师姐，纯化过程中，蛋白出现了浑浊，怎么办呀？
师弟
师姐，NGS测序报告怎么解读，这么多数据哪个有用啊？
师弟
师姐，qPCR扩增曲线无法达到平台期是怎么回事啊？
师弟
师妹
师姐……
师姐
分子生物学实验过程多，容易出错，先跟你们说 3 点提升蛋白表达成功率的小技巧吧！
以下内容全部来自「TIANGEN 科研加油站」系列直播课程，将带你解锁蛋白表达「新姿势」，为你揭秘代谢组学及多组学领域的研究思路，还有「保姆级」反转定量实操教程，以及让科研更便捷高效的各种神器，直播现场还有好礼相送，快通过下方二维码提前预约吧，开播时会收到提醒哦！
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3 步优化蛋白表达
方法一：编码优化
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在开始蛋白表达之前，使用密码子优化算法，计算出合适的编码序列，并为其选择最合适的表达载体，从而能够大大提高蛋白的表达成功率，并且可以节省时间、精力和成本。
方法二：搭配融合伴侣
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可以尝试在重组蛋白中适当添加「蛋白质标签」，也就是一些短肽序列，这种方法可以有效提高蛋白的表达效率，然后再利用酶切技术或化学试剂去除标签即可。
方法三：提升溶解液浓度
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如果遇到蛋白表达量低，有可能时因为我们用来溶解蛋白的溶液浓度相对较低，这种时候，我们应当考虑适当提升溶解液的浓度。
通过以上 3 种方法可以在很大程度上提升蛋白表达的效率及成功率。同时，在实验操作的时候，需要多注意一些细节方面的问题，比如 pH 值、温度控制等等，细节决定成败，实验过程中更是要处处小心才行呢！
最近有一种新方法「CFS 无细胞蛋白表达系统」，可表达高至 360 kDa 的蛋白，实验步骤简单，无需密码子优化，不会形成包涵体，无需培养细胞，所需的表达时间也大大缩短至一天内，师妹也可以尝试一下！
说完了蛋白表达，再分享 3 个可以提高 qPCR 扩增效率的方法。
3 步优化qPCR数据
方法一：反转录前 RNA 上样量要合适
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RNA 上样量最好为 1 μg，最高不超过 2 μg，超过这个范围，会使反转录产物产生偏好性，也就是表达丰度高的基因会优先被反转录，而造成定量结果不准确。
方法二：cDNA 模板浓度不需要测量
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cDNA 是长短不一的 DNA 片段，由于反转录后体系中含有 dNTP 等物质，使得我们利用分光光度计测量浓度不准确；检测 cDNA 一般可以用内参基因做 PCR 扩增，如果内参有结果，cDNA 质量基本可以保证。
方法三：设置合适的预变性时间
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热启动酶原理不同启动时间各不相同，抗体修饰的酶启动时间短，化学修饰的酶启动时间长，热启动时间不正确会导致扩增效率下降，该如何设置预变性时间呢？建议大家仔细阅读试剂盒中的说明书，根据说明书的指示设置预变性时间。
科研之路总是充满坎坷，自己苦思冥想也难寻解决办法，想要提高自己的实验技术？知道的实验常见问题怎么解决？
这些都能在 TIANGEN 直播间找到答案
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科研加油站
2月与你相约
直播预告
直播主题 | 直播时间 |
蛋白表达“新姿势” | 2月8日19:00 |
核酸提取“高效方案” | 2月15日19:00 |
代谢组学及多组学研究思路 “全剖析” | 2月21日19:00 |
“实验室助手”大揭秘 | 2月23日19:00 |
“保姆级”反转定量实验教程 | 2月28日19:00 |
直播现场还有多轮好礼相送
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01 蛋白表达「新姿势」
传统蛋白表达步骤繁琐耗时长，对于膜蛋白和毒蛋白效果欠佳，是否有既可以缩短实验时间，蛋白表达效果又非常好的新技术呢？TIANGEN 直播间将带你解锁蛋白表达「新姿势」。
• 传统蛋白表达的方式和难点
• CFS无细胞蛋白表达系统的原理和特点
• CFS无细胞蛋白表达系统的产品和实验操作
• CFS无细胞蛋白表达系统的多种应用和结果展示
02 核酸提取「高效方案」
核酸提取是分子实验的基础，方便实用的仪器会帮助我们更加高效稳定的完成实验，那我们应该如何选择呢，TIANGEN 直播间将为你带来核酸提取的「高效方案」。
• 常见样本前处理方法
• 低温均质仪特点
• 研磨成功案例分享
• 全自动核酸提取仪
03 代谢组学及多组学研究思路「全剖析」
当下代谢组学研究都有哪些方案？代谢组数据如何分析，又能获得哪些结果呢？作为多组学的「黄金搭档」，代谢组学是如何联合其他组学对生物学问题进行深入探索的呢？本次直播将分享从原理到实践，代谢组学及多组学研究思路全剖析。
• 代谢组学原理及常见技术
• 代谢组学的数据挖掘方法
• 多组学研究思路及实际应用案例
04 「实验室助手」大揭密
「工欲善其事，必先利其器」这句话同样适用在实验操作中，方便实用的仪器会让实验操作更加高效准确，那我们应该如何选择呢？TIANGEN 直播间将为你揭开「实验室小助手」的神秘面纱，敬请期待。
• 样本研磨小神器
• 离心机家族 TIANGEN 发展史
• 控温小能手的正确打开方式
05 「保姆级」反转定量实验教程
反转定量实验现在已经是实验室常见技术，但是在实际上机操作的时候还是会遇到各种问题：为何 qPCR 复孔重复性差？为何目的基因CT值偏大？反转录上样量应该是多少呢？TIANGEN 直播间有一份「保姆级」反转定量实验教程等你来领取。
• 反转录实验详解
• 荧光定量实验详解
• 常见问题分析
还在等什么？赶快报名吧！
内容策划：那雪妍
内容审核：朱超敏
题图来源：图虫创意