干货贴!Real-time PCR 实验注意事项

2023-01-06 19:31 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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PCR 实验 protocol 汇总 


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普通数字 PCR

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巢式 PCR

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Real-time PCR 实验攻略



一、实验中的一些好习惯


1. 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均

2. 移液枪用完之后要归到最大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性

3. 一定要记着关水浴箱,切记切记

4. 多和大家讨论,同时多关注别人讨论的经验,这几乎是最快提高的捷径了

5. 所有的试剂都自己配,出了问题才好找原因


二、常用的 RNA 酶抑制剂有:


1. 焦磷酸二乙酯(DEPC)

2. 异硫氰酸胍

3. 氧钒核糖核苷复合物

4. RNA 酶的蛋白抑制剂(RNasin)

5. 其它:SDS、尿素、硅藻土等对 RNA 酶也有一定抑制作用。


因为 DEPc 不加选择的修饰蛋白质和 RNA,因此在分离和纯化 RNA 过程中不能使用,而且它与一些缓冲液(例如 Tri)不能相容。


在所有 RNA 实验中,最关键的因素是分离得到全长的 RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA 酶)的污染。


RNA 酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。研究人员造成的污染 RNA 酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此进行 RNA 实验时应勤换手套。


那无处不在的 RNA 酶污染,如何有效避免呢?


防止RNA酶污染的措施

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编辑: 王凯

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