转录组测序（RNA-Seq）作为一种高效、快捷的转录组研究手段，在发现新转录本、识别选择性剪接基因、检测等位基因特异性表达等研究中承担起了重要作用，已经被广泛应用于生物医学的各个领域，虽然二代测序高通量、快速且低成本的特点使其成为越来越多研究者的首选，但在实际应用中也会遇到各种各样的问题，比如
➣ 面对不同的样品不会收集和处理；
➣ 转录组测序中存在的系统噪音和偏差无法去除；
➣ 文库浓度过低想要改进却无从下手；
➣ 差异基因的筛选阈值不会定，样品间差异大小不会判断
……
你是否也遇到上述问题难以解决？或者是在自己的课题里加入转录组测序分析时，不知该从哪入手？
为了帮助大家从零基础到掌握转录组测序技术，2022 年 12 月 27 日（周二）15:00 ，丁香园联合诺唯赞生物开展「从原理到应用，带你全面了解转录组测序」的线上直播课程，本次课程将带领大家学习转录组测序的背景介绍、技术流程及案例分析，在实际案例中手把手教学转录组测序。识别下方二维码即可报名参与，准时观看直播更有机会赢取蓝牙耳机、电动牙刷、感应洗手机等上百份精美礼品！
另外，本次直播我们也会针对大家在转录组测序中常遇到的问题进行解答，如果您也有问题亟待解决，可以在直播间提问。先来分享两个常见问题的原因，想了解更多、更完整的答案可以关注本次直播～
1. 文库进行 Agilent 2100 Bioanalyzer 质检，发现产生双峰，产生的原因可能有哪些?
1
非特异性扩增
2
样本特殊性
3
打断剧烈
2. 转录组测序后再使用 qPCR 验证但结果不一致，产生的原因可能有哪些?
由于 RNA-seq 与 qPCR 本身就是两种不同的实验平台，技术及表达量计算原理存在差异，两者不完全一致是正常现象。一般是挑选大量的基因（>= 15）验证，两者的结果从统计学上来说存在较高的相关性（R2 > 0.8)即验证成功，结果出现不一致可能的原因有：
1
没有使用与转录组测序同一批的样本进行 qPCR 验证
2
选取的基因表达量较低或差异不显著
3
qPCR 实验的实验方案、引物设计。比如设计引物是否考虑多转录本的情况，如该基因对应多个转录本，则可能有偏差
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内容审核：邹礼平
项目审核：朱卿
题图来源：图虫创意
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