本文作者：多伦多大学 postdoc 木兰
最近常常在实验室看见闷头处理数据的小师妹，原本朝气蓬勃的小美眉，这几天跟霜打了的茄子一样。
做师姐的不免上去问问缘由，结果发现是 real-time PCR，实验进展不顺利。
一、谈谈引物二聚体为何出现
小师妹碰到的引物二聚体问题是 QPCR 实验中最常见的问题之一。其原因是引物对之间的部分序列存在同源性。
怎么判断自己的 QPCR 出现了引物二聚体？
可以用熔解曲线（又称解离曲线）和凝胶电泳来完成。熔解曲线，是结合染料的双链DNA解离或「熔解」成单链 DNA 时，观察到的荧光强度的变化，比如小师妹做的这张图：
（熔解曲线：real-time PCR handbook from ThermoFisher）如果扩增特异性良好，则解离曲线将出现一个较窄的单峰。而引物二聚体的荧光强度较低，呈较宽较低的「波形」（见师妹熔解曲线图中，在 70°C 左右）。
NTC 扩增了又是怎么一回事？
而 NTC 是指无模板对照——即用水代替荧光定量 PCR 反应中的核酸。其他的试剂按比例正常加入，用于监测反应体系中的污染。正常情况下，NTC 孔中不会有扩增。当 NTC 孔出现扩增时，则预示体系中可能有污染。
（扩增曲线：图来自real-time PCR handbook from ThermoFisher）那引物二聚体的问题，怎么解决？能避免么？
二、引物二聚体解决方法
首先，最好在引物设计阶段就能采取简单的预防措施，从一开始即避免二聚体的形成。有许多方法可以减少或消除反应中的引物二聚体。
我们列举了 5 种常见方法解决引物二聚体
点击下方卡片立即查看
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听了师姐的讲解还是担心做不好？毕竟还有那么多坑呢，常见的不常见的，简直「坑死了」。
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科研提问活动 · PCR 专场
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主题：PCR 类相关科研实验
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*说明：
1、活动最终解释权，归丁香实验所有
2、所有活动数据公平公正公开，任何违规操作刷榜行为，一经发现，将取消活动参与资格，并封禁账号，请诚信参与活动
3、活动奖励，将在 12 月 28 日活动结束后 14 天内，统一安排寄送，请耐心等待
4、此次活动奖励：前 50 位发布提问可获得实验笔记本 1 本；成功发布 2 个提问可获得护目镜一个；成功发布 3 个提问可获得科研顺利帆布袋一个（限量 20 个先到先得，与护目镜奖品不可兼得）。
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