回忆起当年在实验室，拿回细胞后，传代、冻存后复苏过几次都没什么问题，突然因实验室孵箱污染，清洁消毒细胞室后，重新复苏，结果连续复苏 6 支，细胞均未贴壁，到底是为啥？
后来，这一谜团被师兄给破解——可能是冻存液出现了问题！于是，我顺着师兄给的建议，一一排查，终于成功复苏了细胞，今天，我也把自查的要点分享给大家：
细胞复苏出现问题！
以下 7 点需要自行检查：
1、冻存的时候是不是消化的时间过长？太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。
2、冻存液好不好？是甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。
3、你的冻存液的量加的是不是太多？
4、冻存的时候是不是把 DMSO 混均匀？这个有一些影响，但不算太大。
5、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格？
6、是否是细胞污染？
7、细胞在冻存前是否过密？
除了以上复苏问题，平时的细胞培养、传代、以及基础实验也容易出现各种各样的问题。
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当然，从组织选材、原代培养到培养细胞的冻存复苏、污染防治，过程复杂、难度较大。
养细胞不仅要环境好，更要产品佳。优异的产品或许能让你培养的细胞更加茁壮，养细胞的时候少一些提心吊胆。
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【文献标题】自剪切多肽 P2A 对自然杀伤细胞的高效诱导扩增作用的研究
【出版期刊】中华细胞与干细胞杂志(电子版) 2019 年 10 月第 9 卷第 5 期
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2
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【文献标题】人VEGF基因修饰脂肪源间充质干细胞的成骨特性研究 [D]
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OptiTDS™ 组织解离系统
【文献标题】 Combined automated culture system for tubular structure assembly and maturation for vascular tissue engineering
【出版期刊】Journal of Biomechanical Science and Engineering Vol.13, No.3, 2018
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