流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)能够快速测定细胞悬液中单个细胞的生物学性质,并可以对特定的细胞进行分选收集。广泛用于细胞生物学,免疫学,遗传学,基础医学等领域。
高速客观、结果稳定、具有统计学意义,能够处理复杂样本并同时获取多种参数,是它的特点和优势。
那么,流式细胞仪究竟可检测哪些样本?都能检测什么指标?1
可检测样本类型
● 外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞、微生物。
2
可检测细胞结构
● 如细胞大小、细胞粒度、DNA含量与细胞周期 (可以发现癌前病变,协助肿瘤早期诊断) 、RNA含量、蛋白质含量、染色体分析(可用于人类基团组研究、遗传病和癌症的诊听的研究)等。
3
可检测细胞功能
● 如细胞表面/包浆/核的特异性抗原 (评估人体细院免疫功能,对血液病的诊断和治疗检测)、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点 、细胞受体、细胞凋亡(研究多药耐药基因)等。
在了解了流式细胞术覆盖的实验类型后,就要开始进行实际操作了,有 3 个流式细胞实验过程中常常会踩「坑」需要提前注意,包括:
● 小心荧光淬灭:如果抗体孵育时间过长,荧光是会逐渐淬灭的。那如果不得不推迟实验可以把试管放在冰里面,延长淬灭的时间。
● 注意染色顺序:做一系列的不同染色顺序的样本,通过对染色前和染色后的各种样本进行比较分析,判断染色顺序对细胞造成的影响。
● 选好染色方案:在正式开始实验之前,通过预实验,设计出一个完美的染色方案。(考虑试剂种类,试剂质量,试剂用量,孵育时间,洗涤次数,染料浓度,染色时间及染色温度等其他因素)。
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内容策划:那雪妍
项目审核:周育红题图来源:图虫创意