老师我最近跑了一块 WB，为什么有个条带跟其他的不一样？
我
师兄
可能是制胶的时候有颗粒杂质或者是进气泡了啊
那这张呢？是什么问题？
我
师兄
感觉像是胶的泳道底部变形，配完胶没有及时收起来保湿
这么一说，我确实配完去吃了个饭晚放电泳液里了。那这一个条带也是因为胶的问题吗？
我
师兄
这种条带大概率是因为你的胶没有凝固好，你这配胶技术还得再练练啊，WB 实验中胶的质量直接决定最后实验的结果，第一步没有做好的话，后面都白费功夫！
好的，我去好好练习一下。
我
WB 决定成败的关键之一就是胶的配置，胶配不好，前功尽弃。这里就为大家提供一种快速安全配胶的方法！
BioSci™ NewFlash Protein AnyKD PAGE 蛋白电泳凝胶试剂盒
● 使用全新的凝胶技术降低丙烯酰胺浓度，配胶快速安全。
● 配制简单，分离胶和浓缩胶可同时混合，25 分钟即可完成整个制胶过程。
● 配制好的凝胶可以高电压快速电泳，300 V 恒压 25 分钟左右即可完成电泳。
适用于：（1～80）kDa、（10～250）kDa 或（50～300）kDa 等不同分子量大小的蛋白分离。
这么好用的试剂盒，现在免费试用还包邮？
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数量有限，先到先得哦！！
快速蛋白凝胶配制实验步骤
1. 首次使用 NewFlash® 快速蛋白凝胶试剂盒时，请在过硫酸铵（APS）中加入 5 mL 去离子水，充分溶解成 10% 的过硫酸铵（APS）溶液后 -20 ℃ 分装保存。
2. 分离胶配制：取一套干净的玻璃板和制胶装置，安装好，确保玻璃板底部对齐。吸取适量等体积分离胶 A 液和分离胶 B 液在 15 mL 或 50 mL 离心管中混匀备用（参考值：每块 0.75/1.0/1.5 mm 的胶，分离胶 A 液和 B 液各取 2.0/2.5/3.8 mL）。
3. 浓缩胶配制：吸取适量等体积浓缩胶 A 液和浓缩胶 B 液混匀备用（参考值：每块 0.75/1.0/1.5 mm 的胶， 浓缩胶 A 液和 B 液各取 0.8/1.0/1.5 mL）。
注意：本产品凝胶迅速，不要等分离胶灌入模具后才开始配制浓缩胶，时间过长会导致分离胶部分聚合，造成分离胶和浓缩胶分界面不平，影响电泳效果。
4. 分离胶灌注：分离胶混合溶液中加入 10% 过硫酸铵（APS）溶液（5 mL 加50 µL 的 10% APS 溶液），混匀后缓慢灌入玻璃板中，灌胶高度距前玻璃板顶端 1.5 cm 或距梳齿约 0.5 cm 即可。
注意：需要一次性制备多块时，可适当减少过硫酸铵的量来降低凝胶速度，并且 APS 过量会导致凝胶变脆。
5. 浓缩胶灌注：分离胶灌胶结束后无需等待分离胶聚合，立即向步骤 3 的浓缩胶溶液中加入 10% 过硫酸铵（APS）溶液（2 mL 加 20 μL 的 10% APS 溶液），混匀后直接灌入分离胶溶液的上层。
6. 轻轻插入梳子，避免产生气泡。静置（15～20）min，等待凝胶聚合。
注意：制备好的凝胶放入加有少量电泳缓冲液的密封袋中，可于 4 ℃ 保存数周。
7. 上样：凝胶聚合后拔出梳子，可用 1 mL 注射器或者移液枪将胶孔吹洗干净后上样， 推荐使用 BioSci™ 预染蛋白 Marker（Cat# 801102110-245kDa），可在 PAGE 胶上指示蛋白样品分子量。
8. 电泳：本产品可在常规电泳缓冲液中实现快速电泳。电压最高可设置为 300 V，25 min 左右可完成电泳，电流最大不要超过 140 mA，如果电流过大产热多，可降低电压。
注意：本产品可以使用常规电压进行电泳。
9. 电泳结束后，取出玻璃板即可进行后续试验，后续所有试验条件与传统自配蛋白凝胶一样。
产品信息：
可制备凝胶数量：
电泳结果展示：
图 1. A549 细胞蛋白样品，上样量 20 μg，电泳条件 300 V，140 mA，电泳时间 25 min，SpectBlue Protein Staining Reagent（Cat# 8019011）染色
图 2. A549 细胞蛋白样品，上样量 20 μg，检测抗体 Direct-Blot™ HRP anti-β-actin
快速蛋白凝胶试剂盒使用常见问题：
Q
需要在分离胶上倒入乙醇进行压胶吗？
A
不需要，倒入分离胶后可直接倒入浓缩胶。
Q
电泳过程中需要切换电压吗?
A
不需要，本产品可以一直使用 300 V 电压，15～30 min 即可完成电泳。
Q
AB 液混合加入 APS 后多久会凝固？
A
一般 15 min 内就会凝固，可以混合后就倒入玻璃板，不用等分离胶凝固再倒浓缩胶。如果是冬天低温环境可以适当增加 APS 量。
Q
本产品可以用于非变形蛋白电泳吗?
A
可以进行非变形蛋白电泳，但是电泳后对蛋白的生物活性有轻微影响，因此不建议在电泳后再检测蛋白生物活性。
Q
这个蛋白凝胶是否可以兼容常用的电泳液？电泳条件是什么？
A
是的，除了 Tris-Gly SDS 电泳液外，本产品还可兼容 Tris-Gly，MES，MOPS 等多种电泳液，电泳条件见下表：
内容策划：王丹琦
内容审核：邱天天
题图来源：图虫创意
对话框图片来源：丁香园论坛
正文图表均来源于达科为
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