流式细胞术 (Flow Cytometry ，FCM) 实验操作中存在各种可变因素，包括仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等。
由于某个变量，导致实验结果无法重复，常常搞得人心态崩溃……
遇到实验问题，除了请教自己的导师，也会请求实验室师兄师姐的帮助，但是即便如此，有时候也只能得到片面的解答，不能知悉全貌，甚至还是在流式的「坑」里来回打转……所以，对外要学会「借力」，多听听不同的建议和声音。
今天，师兄就给大家整理了一波关于流式细胞术的高频常见问答，最近在做免疫类实验的各位，可以提前学起来，实验不踩坑！
细胞分选
Q：通过染色进行的细胞分选一直不太成功，怎么办？
A：样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些，因为在分选过程中，血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度，并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。
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实验问题解决方案
流式细胞图
Q：流式细胞仪跑出的流式细胞图分群不明显，怎么办？
A：细胞分群不明显有两种可能，一是试剂的问题，二是细胞本身的原因，比如贴壁细胞在消化过程中产生损伤，导致非特异性染色，使得分群不明显。
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实验问题解决方案
细胞周期
Q：流式细胞周期模型 RMSD 值为什么这么大？
A：这个与你流式电压调的太大有关系。另一方面，加入的染料或者抗体浓度有可能过高，建议新买的抗体或者染料做一个梯度稀释，寻找到最合适的染色浓度。
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实验问题解决方案
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