想成为核酸提取高手?一定要知道这三大要点!

2022-07-28 17:33 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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场景一:制备反转录模板


二师弟

大师兄,不好啦!这次实验结果失败了!为啥同样用来提取 RNA 的试剂,这次制备反转录用的 RNA 模板,纯度不高且实验效果也不太好呀?

同样是 RNA 提取试剂,有些对 DNA 敏感的实验中,我们需要采用 DNA 残留极低的 RNA 提取试剂(货号:12183018A)。这样提取的 RNA 纯度高,且几乎不含 gDNA 残留。

大师兄


场景二:敏感型细胞的转染实验


二师弟

大师兄,实验又失败了!为啥同样是质粒提取试剂,这次提取的质粒用于转染,结果转染效率非常低呢?

呆子敏感培养细胞的转染要注意使用无内毒素的质粒提取试剂(货号:A31231)内毒素的存在会很大程度上影响转染细胞的存活率,进而导致实验结果不理想。使用无内毒素的质粒提取试剂,可以有效提高转染实验的成功率。

大师兄


小师弟核酸提取实验总是出问题,说明没有掌握好其中的要点。核酸提取实验作为实验室常用的实验技术,是绝大多数分子生物学实验的基础。但多种多样的纯化方法,眼花缭乱的试剂盒究竟要怎么去选呢?看完下面的总结,你也能成为核酸提取高手!



1. 方法选得对,实验轻松没烦恼!


作为最基础的实验技术之一,目前核酸提取已经发展出了多种方法,从早期直接煮沸裂解细胞提取核酸,再到现在利用层析柱法和磁珠法实现微量和自动化的核酸提取;想要拿到好实验结果,我们应该先学会根据具体的实验材料和实验要求来选择合适的方法。不同的核酸提取方法的原理及优缺点如下表:




2. 记牢这 5 个小要点,实验过程变简单!


选择好实验方法后,整个实验过程中可以注意以下五点帮助你得到更好的实验结果:


① 核酸沉淀这一步保持低温环境、延长沉淀时间,可以提高核酸的提取量。


保持一定的离子浓度。


③ 过酸或者过碱的溶液环境会破坏核酸链中的磷酸二酯键,pH 值保持在 pH 5~9 有利于维持核酸的稳定


避免剧烈震荡、用力搅拌、反复吹打等高强度的物理操作破坏核酸、导致核酸降解。


⑤ 纯化好的核酸检测通常通过光吸收值来检测。较纯净的核酸 A260/A230 的比值一般在 1.8~2.2 之间。比值降低往往是样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍盐)等。


核酸、蛋白吸光度谱



3. 试剂选得妙,多快好省真的妙!


在了解了核酸提取实验需要注意的要点后,选择合适的核酸提取试剂也能帮助你更快掌握实验技术。到现在核酸提取的方法和试剂相对成熟,市场上试剂种类五花八门,要根据不同的实验要求选择合适的试剂。


对于追求产率和更高纯度的实验,可以选用赛默飞的 PureLink 系列试剂,它具有卓越的性能优势,实验失败率更低,数据更好。而对于追求性价比的实验,我们可以选择 GeneJET 系列试剂。GeneJET 以实惠的价格提供不输于一般国产试剂的性能,绝对是省钱的不二选择。当然,无论哪个品牌的试剂,只要运用得当,无论是「头等舱」还是「经济舱」都能带我们平安到达 SCI 的彼岸!


再偷偷告诉大家一个选试剂的小秘诀,针对处理不同的核酸类型如 RNA、miRNA、质粒 DNA 和 gDNA 以及几乎所有的样本类型,赛默飞都有与之对应的核酸纯化试剂盒,是您理想的核酸纯化解决方案。赛默飞官网上的 DNA/RNA 产品选择指南,更能帮助您找到合适的核酸纯化试剂哦。





PureLink™ RNA 小提试剂盒

货号:12183018A


耗时短:约 20 分钟即可完成核酸纯化

产量高:每根纯化柱的产量可高达 1,000 μg 总 RNA

残留少:残留 DNA 污染极低


PureLink™ Expi 无内毒素大量质粒纯化试剂盒

货号:A31231


高产量:分离高达 1.5 mg 高质量质粒 DNA

无内毒素:内毒素 < 0.1 EU/µg,灵敏应用的理想选择

兼容性:适合与 ExpiCHO 和 Expi293 表达系统配合使用


PureLink™ PCR 纯化试剂盒

货号:K310001


高产量:4 倍高于常规提取水平

耗时少:可在不到 10 分钟内完成

方便使用:无需调整 pH 值,操作简单


GeneJET 凝胶回收试剂盒

货号:K0692


高效:高达 95% 回收率,范围为 100 bp 至 10 kb

快速:全程仅需 15 分钟

便捷:离心柱带盖且装有收集管

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内容策划:王丹琦
内容审核:吴军

题图来源:图虫创意


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编辑: 王凯

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