WB 终于出结果了!还以为被「玄学」诅咒,原来是少了这个!

2022-07-12 10:00 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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众所周知,Western Blot 是蛋白检测最常用的方法之一,但是很容易出现问题!今天抗体不行,明天又出现杂带,有时跑完 Western Blot,连做梦都是一团团黑糊糊的条带......

(图片来源于丁香实验平台)


今天,实验君就为大家带来 Western Blot 干货心得总结,助力大家跑出漂亮的条带文中还有礼品活动,最近在做 WB 实验的各位,千万别错过啦~
第一步
熟悉 WB 标准实验步骤
常规的操作步骤包括:蛋白样品制备、蛋白质定量、SDS-PAGE 电泳、转膜、封闭,免疫杂交反应,以及最终的显色,每一步操作的详细步骤,「丁香实验-小程序」都帮大家列出来了。
👇 先按照 protocol 检查一下自己的实验流程吧:
【图解】Western Blot 步骤Western Blot 蛋白样品制备WB 样品粘稠像「鼻涕」怎么办?如何破解免疫荧光有结果 WB 却没条带?

第二步参考视频操作规范流程

很多同学看到文字版标准流程,还是不清楚操作方法,比如怎么制胶、如何转膜最规范?


👇 「丁香实验-小程序」给大家贴心整理了视频版详细操作:
WB实验操作指导视频
第三步
查看 WB 常见问答

如果按照视频做完实验,还是出现了各种各样的奇怪条带!有笑脸状、皱眉状、拖尾的、杂带多、信号弱,甚至没看到目标条带。


那么,完全可以在问答广场上找到不同实验问题的答案:


例如:请问 WB 跑出来的条带与目的条带分子量大小有偏差是为什么?
@vae1476:1. 确定蛋白是内源的还是外源的,如果是外源蛋白是不是全长序列;2. 确定蛋白质是否是二聚体或多聚体;3. NCBI 和 SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰,如有修饰会导致蛋白质分子量变大;
@府宅:可能是胶的浓度与目的蛋白分子量不对应,比如说 100KD 的蛋白你用 12% 的胶跑,或者说 20KD 的蛋白你用 6% 的胶跑。


除了给大家总结干货,如果实验过程中,遇到了蛋白类相关实验问题,也可以抛到丁香实验问答广场上,48 小时就能获得答案
而且,还可以获得英文特赞助的精美礼品哦~一起来看看都有哪些科研好物吧!
(点击图片查看礼品简介)
那么,问题来了如何才能将礼品全部带走呢?
参与:
科研提问活动 · 蛋白专场就有机会带走上述全部礼品哦
(图片来源于丁香实验)
活动时间:7 月 4 日 ~ 7 月 17 日

Step 1:进入丁香实验问答广场,点击蓝色按钮【我要提问】输入问题,选择对应的科研的实验,点击提交。
(点击大图查看提问指导)
Step 2:等待自己的提问发布后,扫码或者戳底部原文链接填写地址,坐等奖品到家就这么简单!
(长按扫码,填写收货信息)
此次活动,将按照成功发布提问数发放对应奖励:
 除此之外,丁香实验还将按照大家的提问获得的围观数,给予额外的奖励,按照活动期间,发布的蛋白质实验问题中,单个问题获得最多围观数的提问人,可以额外获得小型咖啡机 1 台。
欢迎大家将自己的提问,分享至自己的实验室群、学习群等科研人聚集地,帮助有相同实验问题的同学,一同查看解决方案哦~
(分享提问可获得更多围观)

举办活动的初衷是为了帮助大家解决科研实验问题,如果系统识别到恶意刷榜挤占榜单,非科研实验问题一律不予发货哦,请大家公平参与!
当然了,只要是在丁香实验问答广场上抛出的问题,都会得到围观和解答,不仅仅是参与活动领取奖励,还能得到学霸天团对自己疑惑的指导和解答,一举多得!

从现在起到 7 月 17 日都可以参与活动哦,快快来参加吧!



*说明:1、活动最终解释权,归丁香实验所有2、所有活动数据公平公正公开,任何违规操作刷榜行为,一经发现,将取消活动参与资格,并封禁账号,请诚信参与活动
3、活动奖励,将在 7 月 17 日活动结束后 14 天内,统一安排寄送,请耐心等待
内容策划:丁香实验题图来源:图虫创意
↓ ↓ ↓ 提交提问,戳原文链接填写地址

编辑: 王凯

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