PCR——实验室必备实验,从基因鉴定到信号通路验证,几乎每周都要 P 个三五次,但是,有多少人能将 RT-PCR、Realtime-PCR、qPCR 区分开?有多少同学还在犯晕?
今天,一篇文章,带你清清楚楚,明明白白一次性区分开 PCR 「三胞胎」!(文中还准备了科研福利——参与科研提问活动,小风扇、计时器免费领取哦)
一、什么是 RT-PCR?
RT-PCR 就是逆转录 PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应 ( PCR ) 的一种广泛应用的变形。在 RT-PCR 中,一条 RNA 链被逆转录成为互补 DNA,再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。
👉了解更多:反转录 RT-PCR 实验进阶, RT-PCR 常见问题及其分析
二、什么是 qPCR、Real-time-PCR?
其实 Real-time-PCR 和 qPCR 是一码事,都是实时定量 PCR,指的是 PCR 过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。
虽然 Real-time PCR(实时荧光定量 PCR)和 Reverse transcription PCR(反转录 PCR)看起来都可以缩写为 RT-PCR,但是,国际上的约定俗成的是:RT-PCR 特指反转录 PCR,而 Real-time PCR 一般缩写为 qPCR(quantitative real-time PCR)
👉了解更多:qPCR 的基础知识、qPCR 常见问题及其分析
三、什么是 Real-time RT-PCR?
Real-time RT-PCR 中间的 “ RT ” 是 reverse transcription(逆转录),整个意思就是利用 mRNA 或 总RNA 为模板的实时逆转录 PCR 技术(quantitative Real-time RT-PCR)。
real time RT-PCR 指的是 qPCR+RT-PCR 的组合,是说将 mRNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析,因为 RT-PCR 是可以定性的,但不能进行定量检测的。
所以不难理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR) 就是结合了荧光定量技术的反转录 PCR:先从 RNA 反转录得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR 进行定量分析(qPCR)。
所以,实时荧光定量 PCR,它不仅可以用 cDNA 作为模板,也可以用基因组 DNA 等作为模板。
👉了解更多:除了RT 和Q,原位杂交、巢式等更多 PCR 实验种类和应用等你来解锁
了解完 PCR 「三胞胎」之间的区别,相信大家对 PCR 类实验的有了更为清晰的认知。其实,不管是初入实验室的实验新手,还是经验丰富的师兄师姐,只要在 PCR 实验方面遇到了问题,都可以抛到丁香实验平台上,48 小时内给出解决方案,帮助大家更快更好解决实验问题!
千里之行,始于足下,丁香实验助力大家扎扎实实走好科研实验每一步今天,丁香实验面向全体科研人员,发出邀请函,邀请大家参与:
「那么,问题来了」
科研提问活动 · PCR 专场
如果你最近刚好在进行 PCR 引物设计,荧光定量 PCR,RT-PCR……等等PCR 相关科研实验!那么,千万不要错过啦活动期间,在丁香实验平台上,抛出你的实验问题,就能得到由赛默飞赞助的科研好礼!
活动时间:6 月 6 日 ~ 6 月 19 日
主题:PCR 类相关科研实验
这一次的奖励,包括了:夏日清凉小风扇、实验计时器、丁香园加薪水陶瓷杯等实物奖励,还可获得丁当奖励,在丁香商城兑换心仪的礼品哦~
那么,问题来了!
怎么才能获得这些奖励呢?
Step 1:
进入丁香实验问答广场,点击蓝色按钮「我要提问」输入问题,选择关联「PCR 领域」的实验,点击提交。
(点击大图查看提问指导)
Step 2:
等待自己的提问发布后,戳文章底部【阅读原文】填写地址,坐等奖品发货就这么简单!
(请勿提前填写,工作人员会一一进行校对)
获奖攻略:
活动期间发布提问
发布 1 个提问:实验计时器
发布 2 个提问:20 丁当
发布 3 个提问:夏日小风扇
除此之外,丁香实验还将对大家的提交的问题进行评选,提交的实验问题,描述越具体详尽(如有实验图片可直接上传)且是真实发生在实验室当中的,就越有可能被选中哦
(优秀提问示例图)
活动期间,我们将选择 5 个优秀提问,额外送给提问者每人一个加薪水喝水杯,所有奖励将会打包发出。
(图片来源于丁香园)
除了请教自己的导师,还会请求实验室师兄师姐的帮助,但是即便如此,有时候也只能得到片面的解答,不能知悉全貌,甚至还有可能会带偏,所以,对外要学会「借力」,多听听不同的建议和声音。
当然了,只要是在丁香实验问答广场上抛出的问题,都会得到围观和解答,不仅仅是参与活动领取奖励,还能得到学霸天团,对自己疑惑的指导和解答,一局多得!
从现在起到 6 月 19 日都可以参与活动哦,快快来参加吧!
*说明:
1、活动最终解释权,归丁香实验所有
2、所有活动数据公平公正公开,任何违规操作刷榜行为,一经发现,将取消活动参与资格,并封禁账号,请诚信参与活动
3、活动奖励,将在 6 月 19 日活动结束后 14 天内,统一安排寄送,请耐心等待
↓ ↓ ↓ 提交提问,戳原文链接填写地址