Real-time qPCR 引物设计遵循原则 实验设计其实比实验本身更重要！好的实验设计可以事半功倍，节省时间！
对于一个 Real-time qPCR 而言，好的引物是实验本身成功的 50%，Real-time qPCR 引物的设计遵循下面一些原则：
扩增产物长度在 80-150 bp
引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性
产物不能形成二级结构，且长度一般在 15-30 碱基之间
G + C 含量在 40%~60% 之间
碱基要随机分布
引物自身不能有连续 4 个碱基的互补，引物之间不能有连续 4 个碱基的互补
引物 5’ 端可以修饰，引物 3’ 端不可修饰，避开密码子的第3位
Real-time qPCR
操作过程注意事项
1、RNA 提取和反转录：全程佩戴一次性手套。使用灭菌的，一次性的塑料器皿和自动吸管抽提 RNA，避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。 当然，这些也不是绝对的要求。如果是操作熟练，完全可以用初次开封的离心管和枪头，新过滤的超纯水，进行 RNA 的提取。 2、 Mix 配制注意事项：
MasterMix 不要反复冻融，如果经常使用，最好溶解后放在4度，更多的配制 Mix 进行，减少加样误差。
最好能在冰上操作。此外，每管或每孔都要换新枪头！不要连续用同一个枪头加样。所有成分加完后，离心去除气泡。
Real-time qPCR
高频问题解决方案
（点击图片查看解决方案）
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其实，不管是初入实验室的实验新手，还是经验丰富的师兄师姐，只要在核酸基因实验方面遇到了问题，都可以抛到丁香实验平台上。
千里之行，始于足下，丁香实验助力大家扎扎实实走好科研实验每一步
「那么，问题来了」
科研提问活动 · DNA 专场
全新启动啦
活动时间：5 月 23 日 ~ 6 月 5 日
主题：DNA 相关科研实验
如果你最近刚好在进行质粒构建、核酸提取、反转录、斑点杂交……等等核酸基因相关科研实验！那么，千万不要错过啦
活动期间，在丁香实验平台上，抛出你的实验问题，就能得到由赛默飞赞助的科研好礼！
这一次的奖励，包括了：DNA 双螺旋戒指、实用简易小书架、科研顺利帆布袋三种实物奖励，还可获得丁当奖励，在丁香商城兑换心仪的礼品哦~
那么，问题来了！
怎么才能获得这些奖励呢？
Step 1：
进入丁香实验问答广场，点击蓝色按钮【我要提问】输入问题，选择关联「DNA 领域」的实验，点击提交。
（点击大图查看提问指导）
Step 2：
等待自己的提问发布后，戳文章底部「阅读原文」填写地址，坐等奖品发货
就这么简单！
（请勿提前填写，工作人员会一一进行校对）
获奖攻略
活动期间发布提问：发布 1 个提问：DNA 戒指
发布 2 个提问：20 丁当
发布 3 个提问：简易木质书架 除此之外，丁香实验还将对大家的提交的问题进行评选，提交的实验问题，描述越具体详尽（如有实验图片可直接上传）且是真实发生在实验室当中的，就越有可能被选中哦
（优秀提问示例图）活动期间，我们将选择 10 个优秀提问，额外送给提问者每人一个科研帆布袋，所有奖励将会打包发出
（图片来源于丁香实验）举办活动的初衷是为了帮助大家解决科研实验问题，如果系统识别到一次性发布多个问题，或者非科研实验问题，一律不予发货哦，请大家公平参与！
当然了，只要是在丁香实验问答广场上抛出的问题，都会得到围观和解答，不仅仅是参与活动领取奖励，还能得到学霸天团，对自己疑惑的指导和解答，一局多得！
从现在起到 6 月 5 日都可以参与活动哦，快快来参加吧！
*说明：1、活动最终解释权，归丁香实验所有2、所有活动数据公平公正公开，任何违规操作刷榜行为，一经发现，将取消活动参与资格，并封禁账号，请诚信参与活动
3、活动奖励，将在 6 月 5 日活动结束后 14 天内，统一安排寄送，请耐心等待
↓ ↓ ↓ 提交提问，戳原文链接填写地址
内容策划：丁香实验