对于科研人来说，WB 和蛋白纯化都是很基础的实验，但也是容易出错的高发区域。
WB 的实验流程极其繁琐，从配胶到孵育中间一个环节失误都会导致全盘皆输，如果不明白实验原理，想弄清楚失败的原因都很费劲。蛋白表达也是一样，光是选择合适的纯化标签就得耗费一番功夫。
你在 WB 和蛋白纯化过程中又遇到了哪些难题？为了帮助大家解答实验过程中的难题，丁香园联合诺唯赞以及 IBA 打造了蛋白实验研讨会 ：手把手教你玩转 WB 和蛋白纯化。
给大家全面梳理 WB 的基本原理、实验流程、进阶技巧和避坑指南；同时从表达体系、缓冲条件到亲和标签、纯化方法的蛋白纯化攻略，帮你拆解注意事项，提高实验效率。此外还特别邀请了来自中南大学的科研人员带来蛋白质原核表达和纯化的相关知识，千万不要错过。
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对于大家经常遇到的 WB 和蛋白实验难题，我们简单做了梳理：
常规的 WB 操作步骤包括：蛋白样品制备、蛋白含量的测定、SDS－PAGE 电泳、转膜以及最终的显色。在样本准备前首先要选择合适的内参，包括总蛋白内参、细胞组分内参等，在样本预处理的过程中需要注意，大多数修饰类蛋白需要经过诱导才能检测到。后续流程要注意的就更多了，比如一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件；显色液必须新鲜配置使用最后加入 H2O2……
在蛋白纯化标签的选择上，我们常用的蛋白标签有 His tag、GST tag、MBP tag、NusA tag、Strep tag等。His tag 标签小，纯化步骤简便，条件温和，能纯化可溶性/包涵体蛋白，但不适合易氧化蛋白或膜蛋白。GST tag 适合 pull-down 检测，但可能会影响蛋白质的功能和下游实验，如果蛋白不可溶，很难用变性的方法进行纯化。
后续如果还有更多疑惑以及难题可以参会进行学习，了解更多实验技巧。
内容策划：刘果
项目审核：朱超敏
题图来源：站酷海洛
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