5 年经验总结,梳理 10 个必会细胞实验!

2022-04-26 20:36 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
字体大小
- | +

细胞实验是很多同学进入实验室接触的第一类实验,搞定细胞培养后,第二件事就是——做正经实验了。


细胞划痕实验;细胞毒性分析;细胞增殖分析;细胞活性氧(ROS)检测;细胞免疫化学实验;细胞免疫荧光步骤;细胞蛋白质总量样品的制备及分析;细胞RNA含量样品的制备及分析;细胞免疫蛋白共沉淀;细胞转染和分析(稳转;瞬转)


以上都是非常基础的细胞入门级实验,现已收录在丁香实验【细胞常用实验专题】内 👇  点击进入,立即订阅实验专题。


一起看看专题内包含哪些内容吧!



细胞实验简介

基础篇



细胞划痕实验


细胞划痕 (wound healing)法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型。




细胞毒性分析


细胞毒性是指由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。常用细胞毒性检测方法有CCK-8法、MMT法、LDH法。


1、与 MTT 法相比

1)CCK-8使用更为方便,无需洗涤细胞;
2)CCK-8法能快速检测;CCK-8法的检测线性范围广,灵敏度更高;
3)CCK-8法的重复性更好,MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的,需要使用DMSO 等有机溶剂溶解;CCK-8法产生的formazan 是水溶性的,既省去了溶解步骤,又可以减少该操作步骤带来的误差;
4)CCK-8法对细胞毒性小,可以保持细胞原状态;CCK-8法试剂价格较高;


2、与 LDH 法相比

1)CCK-8是加在细胞中,而LDH检测是细胞上清,这样细胞还可以用来做其他实验;
2)LDH法可进行高通量检测;


细胞增殖分析


Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。




细胞 RNA 提取实验


Trizol 是一种单相溶液,由苯酚和异硫氰酸胍等组成。通过加入Trizol,能破坏细胞和溶解细胞成分,利用氯仿的萃取得到上层水相(含RNA)、界面层和下层的红色有机相(含DNA和蛋白)。得到的水层用异丙醇沉淀并经过酒精的洗涤去除杂质,能分离大小不一的各种RNA。


用途:RT-PCR、分子克隆、Northern-Blot、RNA体外转录与翻译等。


细胞蛋白质提取实验


细胞蛋白的提取是生物学实验中一种常见的实验方法,是很多其他生物学实验的前提。


通过加入裂解缓冲溶液以及相应的蛋白酶抑制剂,能较好的保持细胞内生物大分子的天然状态,在透膜剂以及超声破碎仪的辅助下,细胞将发生破裂,内容物释放出来。

蛋白免疫印迹;蛋白免疫沉淀;核浆分离等制备型和分析型实验。




细胞实验简介

进阶篇


细胞 ROS 实验


活性氧(Reactive oxygen species, ROS)是超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等总称。


参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程,与多种神经退行性疾病相关,如阿兹海默症、帕金森症等,通过检测ROS水平,可以评估疾病模型是否建立成功,亦可作为药效评价指标。


细胞免疫化学 & 细胞免疫荧光


免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似,但各有优缺点。




细胞免疫蛋白共沉淀


免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。




细胞转染和分析(稳转;瞬转)


细胞转染是指将外源分子如 DNA RNA 等导入真核细胞的技术。

可以分为瞬时转染和稳定转染,两种方法的优缺点比较如下:



以上都内容来自——丁香实验【细胞常用实验专题】,👇  点击进入小程序,立即订阅实验专题。


如果你是师兄师姐,也可以把本篇文章分享给师弟师妹们!


进入丁香实验小程序

搜索更多细胞相关实验



策划|Olaf题图|自制


编辑: 王凯

版权声明

本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。同时转载内容不代表本站立场。

  • App下载