细胞实验是很多同学进入实验室接触的第一类实验,搞定细胞培养后,第二件事就是——做正经实验了。
细胞划痕实验;细胞毒性分析;细胞增殖分析;细胞活性氧(ROS)检测;细胞免疫化学实验;细胞免疫荧光步骤;细胞蛋白质总量样品的制备及分析;细胞RNA含量样品的制备及分析;细胞免疫蛋白共沉淀;细胞转染和分析(稳转;瞬转)
以上都是非常基础的细胞入门级实验,现已收录在丁香实验【细胞常用实验专题】内 👇 点击进入,立即订阅实验专题。
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细胞实验简介
基础篇
细胞划痕 (wound healing)法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型。
细胞毒性是指由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。常用细胞毒性检测方法有CCK-8法、MMT法、LDH法。
1、与 MTT 法相比
1)CCK-8使用更为方便,无需洗涤细胞;
2)CCK-8法能快速检测;CCK-8法的检测线性范围广,灵敏度更高;
3)CCK-8法的重复性更好,MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的,需要使用DMSO 等有机溶剂溶解;CCK-8法产生的formazan 是水溶性的,既省去了溶解步骤,又可以减少该操作步骤带来的误差;
4)CCK-8法对细胞毒性小,可以保持细胞原状态;CCK-8法试剂价格较高;
2、与 LDH 法相比
1)CCK-8是加在细胞中,而LDH检测是细胞上清,这样细胞还可以用来做其他实验;
2)LDH法可进行高通量检测;
Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
Trizol 是一种单相溶液,由苯酚和异硫氰酸胍等组成。通过加入Trizol,能破坏细胞和溶解细胞成分,利用氯仿的萃取得到上层水相(含RNA)、界面层和下层的红色有机相(含DNA和蛋白)。得到的水层用异丙醇沉淀并经过酒精的洗涤去除杂质,能分离大小不一的各种RNA。
用途:RT-PCR、分子克隆、Northern-Blot、RNA体外转录与翻译等。
细胞蛋白的提取是生物学实验中一种常见的实验方法,是很多其他生物学实验的前提。
通过加入裂解缓冲溶液以及相应的蛋白酶抑制剂,能较好的保持细胞内生物大分子的天然状态,在透膜剂以及超声破碎仪的辅助下,细胞将发生破裂,内容物释放出来。
蛋白免疫印迹;蛋白免疫沉淀;核浆分离等制备型和分析型实验。
细胞实验简介
进阶篇
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)是超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等总称。
参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程,与多种神经退行性疾病相关,如阿兹海默症、帕金森症等,通过检测ROS水平,可以评估疾病模型是否建立成功,亦可作为药效评价指标。
免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似,但各有优缺点。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。
细胞转染是指将外源分子如 DNA RNA 等导入真核细胞的技术。
可以分为瞬时转染和稳定转染,两种方法的优缺点比较如下:
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