qPCR 进阶攻略!附 5 年操作经验视频

2022-04-23 20:01 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:丁香实验
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实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)也称 QPCR,是指在DNA 扩增反应中,以荧光化学物质测单次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。

QPCR原理与操作
QPCR 技术实现了 PCR 从定性到定量的飞跃,以特异性强、重复性好、定量准确、可实时监测等优点成为了分子生子生物学研究中常用工具。


QPCR 自1983年发明以来,经过数次更新迭代,到如今在实验中广泛运用,又经历了什么?感兴趣的同学可以查看 QPCR 发展历程:QPCR发展历程
关于 QPCR 的实验操作,有几个细节你需要知道,这份 5 年 PCR 操作经验视频,请收藏👇

QPCR探针分类
目前,根据荧光基团在寡核苷酸探针上的不同标记形式,各种荧光PCR检测试剂盒所采用的荧光探针基本可以分为三种类型:Taqman探针、分子信标和荧光杂交探针。
关于三种荧光探针的特征比较,点击下方链接进行查询 👉 三种探针比较
1、Taqman 探针设计

当探针完整的时候,荧光被淬灭;随着 PCR 的进行,探针被Taq酶切割,5' 端报告基团游离,荧光被检测。




2、分子信标设计
当分子信标为茎环结构时,荧光淬灭;PCR 变性阶段,该探针的茎部打开形成一条单链,荧光信号释放




3、荧光杂交探针
由于两个不同的探针必须杂交到正确的靶序列时,才能检测到荧光,因此,该方法的特异性增强。


其他 PCR 干货文章,我们附在了文章末尾,感兴趣的同学可自行学习。
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👉QPCR 实验流程👉如何设计 QPCR 引物👉如何判定QPCR下机数据有效性👉 PCR 实验原理及步骤👉 PCR 引物设计技巧👉PCR反应体系和反应条件👉PCR结果定量检测
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策划|米粒;监制|Olaf题图|自制

编辑: 王凯

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