CRISPR/Cas 技术问世以来就备受关注，尤其在获得诺奖之后，得到了更广泛的应用。但在实际研究过程中，大家也遇到了不少难题，即使一些老手也经常会在细节上翻车，为此我们特意总结了几个常见的实验问题并梳理出解决方案，给大家传授经验。除此之外，在文末我们还准备了 500 余份惊喜大礼，kindle、SKG K3、redmi buds3 耳机等等，参与活动就有机会把它们带回家，大家千万不要错过～
1. 靶标位点识别难，灵敏度低、特异性差
传统质粒转录过程，往往使用 Cas9 蛋白，使上下游的 DNA 双链断裂。进行下一步的目的基因敲除或定点插入突变，Cas9 蛋白在这个过程中如果出现传递错误、活性降低等问题，将直接造成位点识别问题，影响实验结果。
解决方案：通过对关键蛋白的优化，替换为分子量更小、反应温度更广的 Cas12a 蛋白可以很好的解决这一问题。相比 Cas9 蛋白，它更易传递到细胞、在 20～48℃ 下均可反应，同时在切割靶点后产生的「附属切割」活性可以实现信号放大，灵敏度和特异性增强。
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2. RNA 扩增产量低、后续步骤表现不佳
在一些组织样品保存时，我们经常会使用福尔马林试剂。在这类样品的实验过程中，往往会因为 RNA 扩增产量较低，引起后续的逆转录或文库制备表现不佳。这是因为福尔马林中的乙醛对样品造成损伤导致的。
解决方案：消除样品的甲醛损伤，可为后续步骤 RNA 提取提高产量和质量。这项技术由斯坦福大学的研究者发现，已成功形成了便捷的试剂盒产品。
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3. 基因鉴方法不会选择
基因鉴定方法的选择与样品来源、样品类型、目的基因选择等均有关。不同的鉴定方法均存在时间长、费用高、试剂仪器昂贵、需要样品量大等不同问题，这些都客观影响着我们的实验。
解决方案：科研人员通过试剂盒的研发与不断改进，将细胞基因型鉴定的复杂过程进行简化，研发出一步法细胞基因型鉴定试剂盒，仅需 36 分钟坐等鉴定结果，并且适用于血液、动物、组织胚胎等多种来源的基因型分析、鉴定。
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内容策划：刘果
内容审核：蒋程博
题图来源：站酷海洛
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