最近带着师弟做在 Western Blot，没想到因为一个实验上的小问题引来了导师的关注，读博好几年，结果因为 WB 的基础问题被导师给怼了，实在太尴尬了。
那你有遇到过类似的尴尬经历吗？不怕，只要 get 到导师分享的硬核技术手册，WB 问题通通都能迎刃而解。赶快扫描下方二维码或点击「阅读原文」，限时免费下载，不要错过哟。
这两本技术手册针对从样本制备到成像分析的每个环节，梳理了基本原理和实验要点。手册还包含详实的技术资源，包括问题排查指南、操作视频、常用试剂配方与产品选择指南。
手册目录概览左右滑动查看更多
这套珍藏版手册究竟有多厉害？
WB 虽然繁琐，但如果你能透彻的了解实验原理，再结合师兄师姐的经验与最新技术资讯，也可以轻松成为 WB 高手。就比如师弟曾遇到的背景脏、假阳性问题，出现这样的情况会有很多原因，我们逐一排查下来发现，解决也很简单。（手册内容部分节选）
以背景脏有污点为例，我们从转膜的基本原理上分析「污点」的来源：
（1）转膜前印迹膜被弄脏可能是原因之一；
（2）在转膜过程中，印迹膜与胶存在气泡可能导致污点；
（3）而转膜完成后的一系列步骤，抗体孵育时间和浓度、甚至品质会是影响因素，另外封闭或洗膜不彻底等也会导致非特异性结合从而出现污点。
了解了这些可能的原因后，答案就呼之欲出了：
（1）转膜时将印迹膜上气泡排除干净，滤纸一次性使用。转膜后，将印记膜用 TBST 中漂洗去除残留凝胶。
（2）选择合适的封闭液，建议使用 5% 脱脂奶粉-TBST 进行封闭，现配现用，室温缓慢摇晃封闭 1 h。
（3）一抗、二抗选择合适的稀释比，稀释倍数过高或抗体品质差均可造成高背景。
如果出现假阴性或假阳性怎么办？还是从 WB 原理出发，以假阴性为例：
（1）没有目的条带，但 Marker 还在，说明大概率转印没有问题；
（2）回到样本处理本身，是否样本降解？在检测某些激酶时需要特别关注；
（3）此外，很多时候内参条带出现而没有目的条带，还需要考虑抗体的特异性；
（4）最后，靶蛋白的丰度也是决定因素之一。
了解了这些可能的原因后，解决问题也就轻而易举了：
（1）首先考虑是实验样品出错，尝试重新准备实验样品；
（2）换用新的一抗和二抗，有时抗体失活会有假阴性结果，对实验样品有非特异结合则会有假阳性，因此需要更换新的抗体重新孵育；
（3）建议大家每次实验一定要设置阳性对照和阴性对照以帮助判断实验结果是否准确，排除出现假阴性和假阳性的结果。
但是自己整理太麻烦了，怎么办？《蛋白凝胶电泳手册》和《蛋白转印与印迹检测技术手册》已经把辅导资料都整理好啦！一站式集齐实验原理、实验方案、操作要点和常见问题。带你轻松做出发表级结果。现点击「阅读原文」，完成简单的问卷即可限时免费领下载哦～
Western Blot 学习中心
不仅如此，赛默飞还专门建立了「Western Blot 学习中心」。实验步骤演示，常见问题的分析和解答，专家解读技术难点等等相关资料一应俱全，能够帮助你充分了解蛋白电泳和印迹检测的方法和技术难点。
无论你是 Western Blot 检测的新手还是希望对目前方法进行优化的经验丰富的科研人员，都可以在这个学习中心收获到满满的知识，它可以帮助你获得更好的 Western Blot 检测结果并更快取得成功！扫码下方二维码，即可免费浏览学习哦～
限时福利
欢迎在下方分享您自己的 WB 实验小贴士，4 月 11 日 17 点前点赞数量前 5 名的同学，可获赠低吸附 WB 孵育盒 1 个。
透明孵育盒和避光孵育盒随机发放
礼品将于 4 月 20 日前发出
内容策划：刘果
内容审核：吴军
图片来源：赛默飞
题图来源：站酷海洛
▼ 点击「阅读原文」，免费下载学习手册