｜内参蛋白不齐
｜目标蛋白太淡
｜蛋白条带奇形怪状 ～
｜背景太脏，根本分析不出来
其实，WB 做不出，一定是其中的一个环节操作不规范。
第一步明确 WB 标准实验步骤
常规的操作步骤包括：蛋白样品制备、蛋白含量的测定、SDS－PAGE 电泳、转膜以及最终的显色，每一步操作的详细步骤，「丁香实验-小程序」都帮大家列出来了。
👇 先按照 protocol 检查一下自己的实验流程吧：
第二步视频操作规范流程很多同学看到文字版标准流程，还是不清楚操作细节，比如怎么制胶、如何转膜最规范？
👇 「丁香实验-小程序」整理了视频版详细操作：
第三步查看 WB 常见问答
如果按照视频做完实验，还是出现了各种各样的奇怪条带！有笑脸状、皱眉状、拖尾的、杂带多、信号弱，甚至没看到目标蛋白。
都不用怕，大家可以在实验库【问答】页面到找不同实验问题的答案：
比如：请问 WB 跑出来的条带跟目的条带大小有偏移是为什么？
@vae1476：1. 确定蛋白是内源的还是外源的，如果是外源蛋白是不是全长序列；2. 确定蛋白质是否是二聚体或多聚体。3. NCBI 和 SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰，如有修饰会导致蛋白质增大；
@府宅：可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应，比如说 100KD 的蛋白你用 12% 的胶跑，或者说 20KD 的蛋白你用 6% 的胶跑。
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丁香实验给大家整理了 15 个 WB 条带形状的「可能原因」和「解决方法」，15 种形状不同的条带，肯定有一款属于你！
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回复【15】立即拯救 WB 条带👇👇👇
策划｜Olaf题图｜自制