我
师姐，老板要我们把实验记录本都交上去检查，还专门把我叫到办公室报告 qPCR 实验进度，啥情况呀？
你还不知道吗，最近因为 qPCR 结果重复不出来，一些国内外的文章都被撤稿了，咱老板也挺重视的。
师姐
我
啊，这么严重？发的什么文章呀，有点好奇。
今年 1 月，荷兰学者发在肝胆领域顶尖期刊 Hepatology（IF = 17）的一篇文章就被撤了，因为文章中的 qPCR 结果不能重复。
师姐
我
17 分？这么高，大咖都会出问题，那我们平时应该注意些什么呀，有点慌？
你知道 MIQE 指南么？
师姐
我
？？？
MIQE 是什么，为什么要做？
qPCR 是分子生物学中使用最广泛的技术，但有些因素会影响 qPCR 的性能，包括实验设计不当、对照和重复不合理、缺乏明确的实验条件和样品处理流程等等。更严重的是，许多发表的文献中因为缺乏足够的实验细节，那么对实验结果进行评价或重复就会遇到很大的困难，因此在 2009 年就诞生了 MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）。点击「阅读原文」，即可下载完整版《实时荧光定量 PCR 国际化标准-MIQE 指南》。
MIQE 是一套准则，对 qPCR 实验所需的最少信息提出了要求，主要是一份涵盖 qPCR 实验全流程的检查表，通过提供所有相关的实验条件和检测结果，以确保高质量的结果，达到任何期刊都能接受的标准。此外研究者需要完全公开所有的试剂、序列和分析方法，以使其他研究者能够重复结果。MIQE 的细节应以简略的形式或作为在线补充发表。
总之 MIQE 的最终目标是建立一个明确的框架，在此框架内进行 qPCR 实验，并为审稿人和期刊编辑提供一个公认的标准，用于评估待发表文章的质量。因此，遵循 MIQE 原则最终产生更一致、更有可比性和更可靠的数据。
MIQE 具体有些什么，该怎么做？
MIQE 是迈向更可靠和可重复的 qPCR 的坚实基础，具体包括 9 大部分，85 个子项目，限于篇幅，列举主要内容：
qPCR 工作流程的每一步的标准化对可靠和可重复的结果至关重要，例如在 mRNA 表达差异的研究中，RNA 的完整性（见下表）不佳就很容易导致错误的结论，最坏的情况是文章被撤回。
RNA 降解导致 Cq 值变化
如何制定一套符合 MIQE 指南的 RT-qPCR 完整解决方案？
MIQE 基因表达分析的 qPCR 解决方案
Bio-Rad 一直为研究人员提供 qPCR 检测所需的优化、验证的工具，遵循 MIQE 的理念制订了符合 MIQE 规范的 qPCR 实验流程方案，特别是 CFX 系列 qPCR 仪和配套的 Maestro 数据分析软件。Bio-Rad 公司更新了 CFX Maestro™ 软件以实现 RDML 数据输出，使用符合 MIQE 标准的实验细节来注释实验过程，并利用正确的统计工具来分析 qPCR 数据。
Bio-Rad 方案 = Reliable Data
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* BIO-RAD 是 BIO-RAD LABORATORIES，INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。
内容策划：刘果
内容审核：周育红
题图来源：站酷海洛
参考资料：
[1]. Bustin SA, Benes V, Garson JA, Hellemans J, Huggett J, Kubista M, Mueller R, Nolan T, Pfaffl MW, Shipley GL, Vandesompele J, Wittwer CT. The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. Clin Chem. 2009 Apr;55(4):611-22. doi: 10.1373/clinchem.2008.112797. Epub 2009 Feb 26. PMID: 19246619.
[2]. Gingrich J et al. (2008). Effect of RNA degradation on data quality in quantitative PCR and microarray experiments. Bio-Rad Bulletin 5452
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