做 microRNA 研究，提升文章档次的三个锦囊

大家好，今天我们介绍这篇文章：MicroRNA-143 Activation Regulates Smooth Muscle and Endothelial Cell Crosstalk in Pulmonary Arterial Hypertension.Circ Res（IF 11.0）. 2015 Oct 23;117(10):870-83.（全文下载链接：http://pan.baidu.com/s/1nvkw6ed 密码：ytw9），并在文后总结部分给大家提升文章档次的三个锦囊。

首先我们看文章的机制图：



在 PASMC（肺动脉平滑肌细胞）中，肺动脉高压发生相关信号通路通过激活 miR-143/145 启动子活性调节 miR-143/145 的表达。 在血管重构过程准哦功能，MiR-143-3p 作为旁分泌信号来介导细胞运动、调控凋亡。在 PAH（肺动脉高压）进展过程中，PASMC 分泌包含 miR-143-3p 的外泌体，并被转运到 PAEC（肺动脉内皮细胞）诱导细胞的运动和血管生成。

这篇文章的内容包括三部分：

1. MiR-143 在 PAH 动物模型、病人样本中高表达，而且 miR-143/145 的表达激活是由于其启动子上游区域含 PAH 相关信号通路中转录因子结合位点所导致；



2. MiR-143 体外功能：影响 PASMC 的运动和凋亡；而 MiR-143 敲除或者抑制后改良了缺氧导致的 PAH 表型；



3. MiR-143 通过 PASMC 分泌的外泌体传递到 PAEC，并调节 PAEC 的运动和血管形成能力。



我们先看一下 PASMC 与 PAEC 的共培养体系（与 Transwell 非常像）：

作者分别用共培养体系和来源于 PASMC 的培养基，来评估含 MiR-143 的外泌体从 PASMC 分泌到 PAEC，并对 PAEC 运动能力的影响。



然后评估 PASMC 来源的外泌体中 miR143 对 PAEC 运动和血管形成能力的影响。



最后总结一下，这篇文章有几个关键词：microRNA；外泌体；肺高血压；转录调节，这篇文章之所以能发 11 分，我们有哪些亮点可供参考，以帮我们提升文章的档次：

不走下游走上游：作者选 microRNA143/145 簇（cluster）作为关键分子，对 microRNA 的经典套路来说，一般会从下游着手，比如预测靶基因，然后在 PASMC 中验证 microRNA143/145 在 PASMC 中的功能（运动、凋亡），然后通过荧光素酶报告基因实验证明 microRNA143/145 对靶基因的调控；而作者呢，则反其道而行之，研究 microRNA 上游的因子对表达的调控，此为亮点一；当然，对 microRNA 启动子和转录因子结合位点的分析验证、以及对甲基化等其他可能调控 microRNA 表达因素的排除也是我们学习的地方；

引入热点：外泌体，在通过 PASMC 验证了 microRNA143 的功能后，作者进一步研究了外泌体中的 microRNA143 在 PASMC 与 PAEC 细胞通讯中的作用，在对外泌体进行大小、电镜、Marker 等方式进行鉴定后，通过共培养体系、条件性培养基两方面验证外泌体在 PASMC 与 PAEC 细胞通讯中的作用，实验设计和方法都很经典，所以做 microRNA 研究的小伙伴，除了常规实验外，可以考虑外泌体作为加分点哦！

体内实验表型逆转：考虑到动物实验的复杂性，体外细胞实验的表型有一定概率在动物实验难以重复，不可否认，作者通过体内动物模型实验对 microRNA143 的进行了干预，并逆转了 PH 的表型，这是本文加分的第三点。