献给初学者:如何看流式细胞术结果中的图?

2017-01-17 19:12 来源:生物学霸 作者:丁香园站友
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FCM 数据的存贮的方式是 FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式。易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。

坐标轴的意义?

单参数直方图

每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布,以直方图的方式来显示。在图中,横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,其单位是道数(channel),可以是线形(line)或者对数(log)。纵坐标一般是相对细胞/粒子数(count)。



二维图

在二维图的中,横坐标/纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,可以是线形(line)或者对数(log)。双参数图可以将样品细胞群分开,从而方便对感兴趣的细胞进行分析。



「Gate」和「Regin」?

设门是流式细胞分析中一种重要的技术,只有通过最佳的设门方式,才能准确地获取和分析数据,从而得到临床诊断和科研中有价值的信息。

On-line gating(threshold gating) 监测/获取数据 

Off-line gating: 分析实验数据          

散射光设门/荧光设门          

散射光/荧光联合设门

多重逻辑门(组合门)多重逻辑门 G3 = R1 and R2 (G3 = R1×R2)

其它: G = R1 or R2 G = R1 not R2

流式图中的颜色与荧光颜色?


流式图中的颜色为区分不同细胞群而人为指定,与荧光颜色无关。

流式图中的阴/阳(N/P)如何划分?

如何做 M1 阴性界限?实际上,这个 M1 的划分完全是根据阴性(同型)对照来的。如下图:左图为同型对照,即:您所检测的物质在阴性组中的基础表达量,可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。右图即阳性组,也就是接受刺激后,功能状态下、药物作用后等。


阴性正好在 101 划分?

其实,我们可以人为地将电压,放大倍数调到相应的大小,使阴性的右边界在某一个值上,(通常划在 101 附近)这样后期做 sample 时好看。当然也可以调到 102,103 次方。

为什么要进行荧光补偿?

流式细胞分析中经常要用到 2 种以上的荧光标记抗体进行染色,而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。

「荧光补偿」这个术语是指修正荧光渗漏的过程,如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。

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编辑: 任悠悠

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